Diagnóstico molecular de Anaplasmosis (Anaplasma marginale) en bovinos de la Cuenca del Papaloapan mediante PCR

Abstract

En México, la industria ganadera es una de las principales actividades económicas y es afectada por distintos factores, entre ellos, enfermedades causadas por patógenos, resultando en pérdidas económicas de hasta el 25 %. Los patógenos son trasmitidos por distintos vectores, siendo uno de los más importantes la garrapata (R. microplus), capaz de trasmitir microorganismos como Babesia spp. y Anaplasma spp. que parasitan los glóbulos rojos de los bovinos y otras especies de animales de interés zootécnico. La anaplasmosis, es causada por distintas especies de Anaplasma spp., y se caracteriza por provocar anemia, fiebre, depresión, ictericia, debilidad, ataxia, y cuando se presenta la enfermedad causada por A. marginale, puede causar abortos y muerte súbita. El tratamiento de esta enfermedad se realiza con antibióticos, que son utilizados de manera descontrolada ya que por lo regular no se cuenta con un diagnóstico adecuado, pues los métodos de detección, como los frotis sanguíneos, presentan falsos negativos debido a que el resultado depende en gran medida de la carga bacteriana en sangre. Los métodos serológicos como ELISA y moleculares con PCR basados en el gen msp5, presentan falsos positivos, ya que tiene una reacción cruzada con otras especies de Anaplasma spp. Debido a lo anterior, en el presente trabajo, se generó un método de diagnóstico molecular con PCR, rápido y preciso para la detección de anaplasmosis causada específicamente por A. marginale, basado en el gen msp1α.

El método de diagnóstico molecular se utilizó para detectar A. marginale en los bovinos susceptibles en la Cuenca del Papaloapan, para esto, se tomaron muestras sanguíneas de las venas auriculares y coccígeas, se extrajo el ADN y se realizó la amplificación de las muestras con dos pares distintos de oligonucleótidos (Fam - Ram y msp1aF - msp1aR). Se diseñó un control sintético mediante una PCR de fusión, de la cual se obtuvo el fragmento Cam T con el fin de evitar variaciones en el control positivo. Por medio de la secuenciación, se confirmaron casos positivos para la enfermedad con un porcentaje de identidad mayor al 99.3 % obtenido de un alineamiento con las secuencias reportadas en la base de datos del NCBI. Asimismo, se encontró la presencia de A. marginale en equinos, lo cual abre la posibilidad de extender el estudio a otras especies de interés zootécnico, así como el interés por identificar las cepas presentes en la región.