Soya modificada con molienda mecánica de alta energía como sustrato para el crecimiento de Bacillus Thuringiensis y difracción de rayos x para la detección de la proteína cry.

Abstract

Bacillus thuringiensis es una bacteria de gran interés comercial debido su capacidad para producir la proteína Cry, ampliamente utilizada como controlador biológico de plagas y recientemente propuesta como posible fármaco contra el cáncer. Debido a la importancia comercial de B. thuringiensis, diversos trabajos se han publicado sobre los medios de cultivo para su producción buscando sustratos baratos y de alta disponibilidad. Sin embargo, estos sustratos requieren de un pretratamiento que incrementa los costos de producción. En trabajos previos del grupo de trabajo se ha utilizado a la molienda mecánica de alta energía como un método de pretratamiento rápido y de bajo costo. En el presente trabajo se propone el uso de soya modificada por molienda mecánica de alta energía como sustrato para la producción de Bacillus thuringiensis. Para ello se comparó el crecimiento de la bacteria en diferentes medios de cultivo con soya texturizada, harina de soya o soya modificada por molienda mecánica. Por otro lado, también se han reportado diversas técnicas para la detección y cuantificación directa e indirecta de la proteína Cry. Sin embargo, en dichas técnicas no se utilizan estándares de las proteínas puras debidas a que existen más de 700 proteínas Cry de diferentes tamaños, a que su proceso de purificación es muy complicado y a que no existen en el mercado. Considerando que Cry es un cristal proteico, en el presente trabajo se propone el uso de la difracción de rayos X de polvos para la detección de dicha proteína de manera más rápida. Para lo cual se utilizaron tres cepas de Bacillus thuringiensis, la variedad HD-73 (variedad que produce proteína Cry y esporas), variedad BNA 6 una cepa asporogenea (produce Cry y no produce esporas) y una variedad acristalifera Cry B (no produce Cry y si produce esporas). También se utilizó la cepa de Bacillus subtilis 168 como control negativo ya que no produce proteína Cry pero si produce esporas. La molienda mecánica de alta energía cambia las concentraciones de azúcares reductores y nitrógeno amínico. La mayor concentración de azúcares reductores y de nitrógeno amínico de la soya se obtuvo a los 5 y 8 min de molienda, respectivamente. La máxima concentración de bacilos se obtuvo con el medio Gerry Rowe con soya molida durante 5 min. La difracción de rayos X de polvos es una técnica cualitativa que permitió la detección de cristales de proteína Cry. Los difractogramas de muestras a distintos tiempos permiten detectar el posible inicio de la formación de la proteína Cry.