Optimización del método de aislamiento de proteínas de origen parasporal producida por la cepa ac8 de bacillus thuringensis

Abstract

Las Parasporinas (PS) producidas a partir de Bacillus thuringensis han sido reconocidas por su efecto citotóxico en algunos tipos de cáncer y tienen la capacidad de discriminar entre células cancerígenas y no cancerígenas. Estas propiedades han impulsado a investigadores a mejorar las condiciones para optimizar el proceso de este cultivo bacteriano, así como la recuperación y purificación de dichas proteínas, con el objetivo de proponerlas como una alternativa terapéutica en el tratamiento contra el cáncer. Actualmente, en el grupo de trabajo existen protocolos para aislar proteínas (PS) de B. thuringensis, sin embargo, dichos protocolos carecen de reproducibilidad, por lo que el objetivo de este trabajo de investigación fue la utilización e implementación de cultivos en medio líquido (caldo nutritivo) y sólido (agar nutritivo), así como la recuperación y aislamiento mediante electroforesis SDS-PAGE, además, se evaluaron tres métodos de purificación para la obtención de mayor rendimiento proteico. Los resultados demostraron que el cultivo en medio sólido permitió una producción abundante de cristales proteicos con pesos moleculares de 14, 26, 32, 40, 66 y 87 kDa y una morfología esférica con superficie ondulada. El método de electroelución y ultrafiltración demostraron concentrar la mayor cantidad de proteínas y eliminar los interferentes. Por último, los ensayos de seguridad farmacológica demostraron que las proteínas de 14, 26, 32, 66 y 87 kDa no generan daño en células sanas y las proteínas de 14 y 26 kDa son PS con efecto citotóxico en la línea celular MCF-7 de cáncer de mama.