Subclonación y expresión del antígeno recombinante TSA-1 de Trypanosoma cruzi fusionado al dominio de unión a maltosa

Abstract

En el presente trabajo se dan a conocer los resultados del proceso de subclonación y expresión de la proteína recombinante TSA-1 del parásito Trypanosoma cruzi, causante la enfermedad del Chagas en América Latina y el resto mundo. El antígeno TSA-1, es una glicoproteína de superficie de tripomastigote del protozoo Trypanosoma cruzi. En pruebas farmacológicas ha demostrado ser un fuerte elicitor de linfocitos T CD8+, generando altos niveles de respuesta inmunogénica en pacientes infectados. El antígeno TSA-1 fue seleccionado para formar parte de la composición de una vacuna terapéutica capaz de tratar la enfermedad del Chagas en fase aguda y grave. Anteriormente, el antígeno de origen recombinante rTSA-1 se expresó en el vector pET-41a; la expresión fue altamente eficiente, sin embargo, la proteína se encontraba en cuerpos de inclusión. Por ello, con la implementación de técnicas de ingeniería genética y biología molecular, rTSA-1 se fusionó a la etiqueta de unión MBP (rTSA-1-MBP) con el objetivo de facilitar su expresión en forma soluble. Se subclonó el inserto rTSA-1 en un nuevo vector de expresión de la serie comercial pCri, el vector pCri-1b, que permite la sobre expresión de proteínas recombinantes en E. coli. Se implementaron diferentes estrategías de expresión para la síntesis de la proteína rTSA-1-MBP en E. coli, usando distintos genotipos E. coli, cambios de temperaturas en el crecimiento celular, suplementación del medio de crecimiento con glucosa y cromatografía de afinidad Ni-Sefarosa para purificar la proteína rTSA-1-MBP de los extractos celulares. Finalmente se utilizaron técnicas de Western blot para la identificación de la proteína rTSA-1-MBP y amplificación por PCR para verificar que el nuevo vector (pCri-1b TSA-1-MBP) tuviera presente el gen que expresa la proteína rTSA-1-MBP. Se confirma la expresión de la proteína recombinante rTSA-1-MBP en concentraciones debajo de los femto gramos tras visualizarse en un análisis de Western blotting. A pesar de que no se pudo expresar la proteína en las concentraciones requeridas, esta investigación indicó que es necesario mejorar la estrategia de producción mediante la modificación estructural de la proteína como su reducción de tamaño al mínimo antígeno, entre otras.