Evaluación de métodos de extracción de proteína total de Tecoma stans

Abstract

T. stans es una planta ampliamente utilizada en la medicina tradicional mexicana para el tratamiento de diversas enfermedades y afecciones, principalmente la diabetes. Se ha comprobado que posee actividades terapéuticas de tipo antiinflamatoria, anticancerígena, antibacteriana, antifúngica, antioxidante, hepatoprotectora y actúa en la cicatrización de heridas. En el presente trabajo se evaluaron cuatro metodologías diferentes de extracción de proteína total utilizando un cultivo ex vitro de T. stans, con la finalidad de establecer un único protocolo para estudios proteómicos de hoja y raíz. Para la extracción de proteína se usó una muestra con 0.25g de hoja y otra con 0.5g de raíz. Los extractos fueron cuantificados mediante la técnica de Bradford, posteriormente se evaluó la cantidad de proteína soluble que se obtuvo de cada protocolo, así como para cada tipo de órgano. Las muestras de proteína de cada protocolo se cargaron a una electroforesis SDS-PAGE al 9%, con el fin de observar el número de bandas, resolución y nitidez de las muestras proteicas, además, se seleccionaron tres bandas proteicas del gel SDS-PAGE (proteína soluble de hojas) en el rango de 20-35kDa. Solo una de las bandas presento actividad antiproliferativa (28kDa). Hasta el momento, no existen reportes de esta planta en la producción de proteínas con dicha actividad, solo lo reportado en sus metabolitos secundarios. El análisis de varianza del número de bandas obtenidas, sugiere que tanto el tipo de órgano, el método de extracción y su interacción tienen efectos significativos en cada experimento. Con base a las interacciones de las medias obtenidas en la prueba Tukey con 95% de confianza, el mejor efecto se observó al utilizar TCA/acetona para extraer proteína a partir de raíces (22±1 bandas). Por lo tanto, en este trabajo no solo se estableció la metodología de extracción más óptima, sino también se evaluó dicha actividad, obteniendo resultados satisfactorios que sugieren realizar más estudios proteómicos sobre T. stans.