Producción de limonoides en cultivos in vitro de azadirachta indica

Abstract

Azadirachta indica A. Juss, comúnmente conocido como Neem, produce más de 300 metabolitos secundarios, un tercio de los cuales son limonoides de interés comercial y científico por sus efectos biológicos. El cultivo in vitro de A. indica es un sistema de amplio de estudio para la producción de limonoides (AZRL). El objetivo fue evaluar la variación somaclonal y la producción de limonoides en cultivos in vitro de A. indica bajo diferentes combinaciones de reguladores de crecimiento vegetal (RVC). Para ello, se probaron 5 tratamientos de combinaciones de RCV: T1 (ANA 2.0 mg/L y BAP 1.0 mg/L), T2 (ANA 1mg/L y Kin 0.5 mg/L), T3 (IAA 0.2 mg/L y BAP 0.1 mg/L), T4 (IBA 8.0 mg/L y BAP 4.0 mg/L), y T5 (IBA 4.0 mg/L y BAP 1.0 mg/L), y 1 tratamiento sin reguladores como control, (T0). Para la inducción de callos se utilizaron como explantes hojas juveniles y semillas. Los tratamientos T1, T4 y T5 produjeron callos de tipo friable, mientras que los callos generados en los tratamientos T2 y T3 fueron rizogénicos, en los dos tipos de explantes. La producción de AZRL fue máxima en los callos proveniente de semillas generados en el tratamiento T5 (819.24±0.45 mg AZRL/g. P.S). A partir de los callos originados de los explantes de hojas y semillas en los tratamientos T1 T4 y T5, se establecieron suspensiones celulares, siendo en el tratamiento T5 donde se alcanzó la mayor producción de AZRL (256.45 mg AZRL/L). La variación somaclonal de los cultivos de callos y suspensiones celulares fue analizada mediante RAPDs. Los callos provenientes de hojas juveniles y semillas mostraron un polimorfismo del 78.8% y 90.8% respectivamente, siendo el cebador OPQ-06 el que mostró mayor número de bandas en ambos casos. Mientras que la variación somaclonal en las suspensiones celulares de hojas y semillas fue de 85.5 y 87.1% respectivamente, siendo los cebadores OPQ-10 y OPA-05 en las suspensiones de hojas y OPQ-06 y OPQ-10 para las suspensiones de semillas los que mostraron mayor polimorfismo. Por consiguiente, los cultivos in vitro de A. indica presentaron variación tanto somaclonal como en la producción de AZRL en función de la combinación de RCV.