Producción, purificación, caracterización y determinación del mecanismo hidrolítico de extractos enzimáticos con actividad N-acetilhexosaminidasa de Beauveria bassiana y Penicillium sp utilizando chapulín y camarón como fuentes de carbono

Abstract

En este estudio se identificó el mecanismo hidrolítico de extractos enzimáticos con actividad Nhasa provenientes de hongos filamentosos como B. bassiana y Penicillium sp utilizando como sustrato dos fuentes quitinosas: camarón y chapulín. Se demostró que B. bassiana y Penicillium sp logran mayor actividad Nhasa utilizando chapulín como inductor. El proceso de purificación inició con la precipitación con sulfato de amonio al 80% de saturación (0.40 mU/g y 0.46 mU/g para Psp-Ch y Bb-Ch respectivamente) seguida de ultrafiltración con membrana de 30 kDa (para Psp-Ch 0.30 mU/g y para Bb-Ch 0.59 mU/g de actividad específica Nhasa), diálisis y diafiltración (0.45 mU/g y 0.40 mU/g para Psp-Ch y 0.27 mU/g y 0.36 mU/g para Bb Ch). En las etapas de purificación, la ultrafiltración tuvo el mayor porcentaje de rendimiento de 24 % purificando 1.2 veces para Psp-Ch y de 69 % purificando 2.6 veces para Bb-Ch. Se evalúo el efecto de pH y temperatura en conjunto en los extractos enzimáticos purificados de ambos microorganismos donde se obtuvieron para Psp-Ch 19 mU/mL de actividad Nhasa en un pH de reacción de 6 y a 20 °C, mientras que con el extracto Bb-Ch la mayor actividad Nhasa (16 mU/mL) se obtuvo a pH 5 y 20 °C, siendo para Psp-Ch 1.2 veces mayor.