Evaluación de la expresión de los genes de p53, BCL-2, caspasas 3, 6, 8 y 9 en la línea celular MCF-7 después del tratamiento con la parasporina A24-2

Abstract

El cáncer de mama es la principal causa de muerte por cáncer en el mundo, siendo en México principal causa de muerte por cáncer en mujeres, en este sentido, se siguen desarrollando novedosas estrategias que sirvan como fuentes alternativas para su tratamiento. De lo anterior, los grupos de investigación de B. thuringiensis han llevado al descubrimiento de inclusiones proteicas que contienen a un grupo único de proteínas denominadas "Parasporinas". Estas proteínas tienen la cualidad de tener actividad citotóxica preferente o selectiva sobre las células de origen canceroso, muchas de ellas activan la muerte celular denominada apoptosis, y mejor aún no son tóxicas para las células no cancerosas además de no causar hemólisis.

Estudios previos en el grupo de trabajo demostraron que la parasporina A24-2 posee actividad citotóxica contra células MCF-7. Sin embargo, no se conocía si la parasporina A24-2 al igual que otras parasporinas activan la apoptosis como el mecanismo que lleva a la muerte de las células MCF-7. El resumen de resultados de este trabajo indica que se confirmó la actividad citotóxica en células MCF-7 mediante ensayos de MTT, así como la nula actividad en células HEK-293T y la no inducción de hemólisis. Además, se realizaron bioensayos de 24 horas de tratamiento en células MCF-7 y HEK-293T con la parasporina A24-2 de los cuales se extrajo el ARN total. Se evaluó la expresión de genes de caspasas 3, 6, 8, 9, p53 y Bcl-2 involucrados en la vía extrínseca e intrínseca de la apoptosis mediante qPCR. La parasporina A24-2 no indujo cambios morfológicos significativos en células HEK-293T, mientras que sí hubo cambios morfológicos característicos de apoptosis en células MCF-7 después de 24 horas de tratamiento. El análisis por qPCR mostró que todos los genes evaluados tuvieron una expresión similar a la encontrada en el control negativo, resultado que evidencia que a las 24 horas de exposición con la parasporina A24-2 no se logra detectar la inducción de la apoptosis como mecanismo de muerte de las células MCF-7, resultados que contradicen lo observado en las micrografías donde se observaron cambios morfológicos característicos de apoptosis. Mientras que en las células HEK-293T hay una disminución de la expresión del gen p53 y un incremento de la expresión génica de Bcl-2, un factor que inhibe la apoptosis y por ello el nulo incremento de la expresión de las caspasas analizadas en las células HEK-293T.